首页 > 名字 > 游戏名字 正文
引物合成游戏昵称一个—引物合成仪器 引物合成

时间:2023-06-21 作者:佚名

近年来测序很火,很多实验室正在或已经完成了sRNA的测序工作,miRNA研究越来越火,然而,找公司设计引物合成引物真心贵(对于我们穷屌丝来说……)。本人自己动手琢磨了会,哎哟喂~效果良好!

好了不闲扯了,下面给大家分享一下我的方法。

miRNA引物设计(茎环法)原理:由于miRNA在20bp左右,没法根据其设计引物检测出来,于是,人们就先将其延长,也就是先加一个环状片段,这样就使得原来20bp左右的延伸为80bp左右了,然后就可以根据这个80bp片段设计引物啦。

具体操作:

需要三种引物:逆转录引物(RT-primer,用于延长miRNA的)、实时定量PCR上游引物、实时定量PCR通用下游引物。

1、逆转录引物

逆转录引物序列由5’端茎环结构引物和3’端miRNA特异性序列组成。“特异的反向引物约42-44个核苷酸,其5’端的36个核苷酸序列是固定的,形成一个8核苷酸环和20核苷酸茎的结构,其3’端的6-8个核苷酸就与microRNA互补。”5’端茎环结构通常固定,如5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3’ ;3’端特异性序列由与成熟的miRNA 3’端若干寡核苷酸反向互补配对所得。

即:逆转录引物为“5‘- CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGNNNNNNNN-3’(N 为miRNA3’端反向互补的6-8个碱基)。

通俗地说就是,固定的颈环序列(网上很多或者用我这个也行)+miRNA末端6-8个反向互补碱基。

以 mmu-[size=14.6666669845581px]miR-16-5p ([size=13.3333330154419px]UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG) 颈环序列+末尾 8个碱基反向互补。即为 :

CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGcgccaata

[size=13.3333330154419px]

2、实时定量PCR上游引物

上游引物包括5’端通用序列和3‘端miRNA特异序列,5’端通用序列为:5’-GCCGAG-3’或5’-TCGGCAGG-3’,用于延伸实时定量PCR产物的长度;3’端为跟据成熟miRNA自身碱基组成及GC含量适当删减几个碱基所得的寡核苷酸或完整的成熟miRNA。

即:上游引物为5‘- 通用引物+NNNNNNNNNNNNNNNNN-3’ ,自miRNA5’端抄起,14-16个或13-14个。

通俗的说就是:保护性碱基(用来调GC含量的)+miRNA 5 端的13-16个碱基(不要抄到最后那6-8个上去了,意思就是不要与RT那段重叠了)

3、实时定量PCR通用下游引物

下游通用引物:5’- CTCAACTGGTGTCGTGGA -3’ (茎环引物上取,可以挪)这个就更简单了,直接在颈环上摞一段即可,然后计算下gc完事。

嗯的,如果你有土豪boss罩着,可以忽略本文,找生物公司做引物设计。

来源:基迪奥生物

本文信息为网友自行发布旨在分享与大家阅读学习,文中的观点和立场与本站无关,如对文中内容有异议请联系处理。

本文链接:https://www.paituo.cc/ming/yx/1078656.html

  • 小编推荐

    〔引物合成游戏昵称一个〕合成引物…

    引物合成游戏昵称一个,合成引物,引物合成哪家公司比较好相关介绍,作者:解螺旋·子非鱼 如需转载请注明来源:解螺旋·医生科研助手 ·导语· 好的引物会让PCR实验成功一半,因而,引物设计一直都是PCR非常重要的环节。PrimerPremier5和Oligo7这两款软

    引物合成游戏昵称一个引物合成哪家公司比较好

    引物合成游戏昵称一个,引物合成哪家公司比较好,引物合成仪器相关介绍,作者:解螺旋.冬至 转载需授权注明来源:解螺旋,医生科研助手 小伙伴们,当我们看到国外实验室的英文paper中,很少有用Primer Premier5 设计引物,但看我们中文的paper,或是国内实验

    (情侣游戏昵称女沙雕网名)游戏情侣cp昵称沙雕? 游戏昵称情侣专用沙雕

    情侣游戏昵称女沙雕网名,游戏情侣cp昵称沙雕,游戏昵称情侣专用沙雕相关介绍,Hello!大家好,这里恋尚游戏,每天都为大家带来最新游戏资讯! #王者荣耀#这款游戏我们都知道是一款非常火爆的游戏,推出至今五年仍然占据手游排行榜第一的位置!并且由于操作简单,所以粉丝年龄段跨度也是

    [网球王子游戏昵称符号]游戏昵称符号大全花样符号? 游戏昵称符号大全花样符号

    网球王子游戏昵称符号,游戏昵称符号大全花样符号,游戏昵称带符号相关介绍,还记得那年风靡的网球王子么?还记得酷炫呆萌的龙马、睿智成熟的手冢、霸气逼人的迹部......作为四大运动动漫(足球小将、网球王子、灌篮高手、棒球英豪)之一,可谓粉丝无数,还曾被拍为动漫、舞台剧和真人电

    “百度游戏昵称女简单高级“情侣游戏昵称简单气质… 简单好听的游戏昵称

    百度游戏昵称女简单高级,情侣游戏昵称简单气质,游戏女昵称简单好听相关介绍,不要试图去理解所有事,有时我们不需理解,只需接受。今天可爱点为大家送上一些游戏昵称女生简短好听,希望你们喜欢! 小脸红扑扑 冷酷、娃娃 乖囧猫 软醉萌女 诗意仙女 仙味少女心 暖心萌菇凉 甜宠软妹 小

    〔排球游戏情侣昵称英文名〕情侣昵称哥哥的英文名叫什么 情侣cp昵称英文名

    排球游戏情侣昵称英文名,情侣昵称哥哥的英文名叫什么,情侣cp昵称英文名相关介绍,下文是蜜匠婚礼网精心整理的一篇关于英文情侣网名好听一对以及情侣网名2字简洁好听,咱们一起来看看吧,希望对你有所帮助。   一、英文情侣网名好听一对   1、喜欢什么/败给什么   2、三分依赖/七分疼

    日本游戏昵称英文简短网名—英文昵称女生简短好听网名 网名昵称男生简短好听英文

    日本游戏昵称英文简短网名,英文昵称女生简短好听网名,昵称简短好听英文网名相关介绍,网名:Mottled(斑驳) 网名:Initially(最初) 网名:Flowers (花朵) 网名:Smithereens(碎片) 网名:Erase(抹去) 网名:Dialog(对白) 网名:Lif

    (小球游戏昵称英文特殊符号)带特殊符号英文个性昵称… 英文昵称带特殊符号

    小球游戏昵称英文特殊符号,带特殊符号英文个性昵称,微信昵称英文特殊符号相关介绍,彩色:在输入名字的地方先输入英文符号里的[ ]然后在里面输入代码,后面跟名字。 例如:我想用 黑色的老张 这名字 就是:[000000]老张 代码大全如下: 空白名字:在输入名字的地方先输入表情,然后