分离XXX疾病动物相关细胞，检测XXXX的变化是否影响细胞的相关功能，如增殖、迁移、分化等。

3)在细胞水平上明确XXX在该疾病过程中可能的机制

为了进一步明确XXXX在XXX疾病过程中的详细机制，我们使用XXX细胞(细胞系或者分离的原代细胞)，给予细胞什么处理或者怎么分组，培养多久后做哪些相关方面的检测。如收集细胞总蛋白，检测蛋白表达;收集细胞总RNA检测基因表达变化;收集细胞做细胞功能检测等。最终通过该部分实验明确XXX是通过什么机制在XXX疾病过程中发挥作用的。

4)在动物水平上验证XXX作为XXX疾病治疗的可行性

为了明确XXX分子或者其调控的XXX信号通路是否可以作为XXX疾病药物治疗的靶点，我们使用XXX(可以是蛋白分子或者信号通路的抑制剂等)作为药物给予疾病动物治疗，治疗后收集不同的样本，检测相关的疾病指标，最终明确是否XXXX或者其调控的XXX信号通路可以作为XXX疾病治疗的靶点。

(2)研究目标：

1)明确XXX是否与XX疾病的发生和发展具有临床上的相关性;

1)明确XXX是否对XX疾病具有保护性或促进性作用;

2)确定XXXX调控XXX功能可能的信号通路或关键性的靶点分子;

3)验证XXX作为XX疾病药物治疗靶点的可行性。

(3)你解决的关键科学问题

1)明确XXX是否与XX疾病在临床上存在相关性;

2)成功构建XXX实验检测系统/实验方法等;

3)明确XXX是如何通过参与XXX信号通路来发挥其对疾病的影响作用的。

3、拟采取的研究方案及可行性分析

(1)研究方案

1)在人类组织水平上验证XXX与XX疾病是否具有相关性

临床样本的收集

主要包括收集的样本数目，收集样本的标准，哪些样本需要排除在外，样本中相关物质或成分的分离、处理以及保存等等

临床样本的检测

使用XXX方法(方法一)，检测XXXX;

使用XXX方法(方法二)，检测XXXX;

使用XXX方法(方法三)，检测XXXX。

2)在动物水平上验证XXX对XXX疾病动物模型的保护性作用及可能的作用机制

动物实验

使用什么方法构建XX疾病动物模型，动物模型如何构建，如何分组，每组如何处理等。在什么时间做哪些相关处理。如给药处理X天后，使用XXX试剂麻醉动物，分别取XXX、XXX、XXX等组织进行相关检查。

体外实验

使用XXX方法(方法一)，检测XXXX;

使用XXX方法(方法二)，检测XXXX;

使用XXX方法(方法三)，检测XXXX。

3)在细胞水平上明确XXX在该疾病过程中可能的机制

细胞的分离、培养及处理

使用什么方法(如何操作)，获取什么细胞(如何获取)，该细胞如何培养(培养基、培养条件、细胞密度等)，如何处理(处理剂量、时间)，处理多长时间，如何分组等。处理方式有：过表达、基因抑制、药物处理、相关抑制剂处理、相关激动剂处理等。根据处理不同对细胞进行分组。

细胞功能检测

细胞增殖情况检测：MTT法、CCK-8、流式细胞术、CFSE染色等;

细胞凋亡检测：DNA ledder、caspase-3、Annexin V/PI染色等

细胞迁移功能检测：细胞划线实验、Transwell实验、过继转移实验，凝胶迁移实验等

细胞分泌因子浓度检测：Western Blot、FACS、ELISA等

细胞分化检测：qPCR、WB检测关键因子、流式检测关键蛋白、镜下细胞表型观察等。

4)在动物水平上验证XXX作为XXX疾病治疗的可行性

动物实验

构建动物模型，不同剂量给药分组(给药可以是该分子的重组蛋白、功能性抑制剂、中和性抗体以及该分子所调节的信号通路的抑制剂等)，不给药组作为阳性对照，健康组作为阴性对照。

疾病指标检测

检测疾病相关指标，具体根据研究的疾病不同而定。

(2)研究技术

这里详细叙述几种该项目中使用到的但是不是常规的实验技术，详细到该实验操作的每一步骤，可以分条陈述.常用实验研究技术如下：

1) XX疾病动物模型的构建;

2) 逆转录病毒/慢病毒/腺病毒介导的基因过表达和基因沉默技术;

3) 通过细胞划线实验、Transwell实验检测细胞迁移能力;

4) Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡水平;

5) CFSE染色检测细胞增殖;

6) 原代细胞分离机培养;

7) 免疫共沉淀检测蛋白-蛋白之间相互作用;

8) 染色质免疫共沉淀技术检测DNA-蛋白质相互作用;

9) RNA结合蛋白免疫沉淀检测RNA与蛋白之间相互作用;

(3)技术路线

技术路线图(可以根据研究内容放置四个)

(4)可行性分析

理论上的可行性

课题设计合理，技术平台成熟

本课题组长期进行XX疾病或临床问题的研究，对该领域的研究现状和问题非常了解，并在该领域进行了相关性的研究，在此已有的研究基础上我们找到并提出XXXX的假说。XXX在该疾病中表达异常，且我们发现其表达水平与疾病发生具有相关性。我们在前期工作中已成功的通过XXX实验方法，发现XX现象，部分验证了我们所提出的假说。所以该项目在理论上完全可行。

技术上的可行性

申请者长期从事XXX方面的研究，对于该领域所必需的实验技术，如细胞凋亡、增殖、分化及迁移等功能的检测、相关动物模型的构建等申请者及申请者团队人员均已熟练掌握。另外，在前期的研究工作中，我们已经成功建立的XXX技术或实验系统，能够保证该项目的顺利展开。同时，XXX实验材料我们已经与XXX单位合作，对方单位已经授权或愿意协助我们完成哪些方面的实验以及给予提供实验材料等。该项目在技术上是可行的。

条件上的可行性

本课题组具备细胞生物学，分子生物学必需的仪器设备，如流式细胞仪、荧光定量PCR仪、免疫组化相关设备、荧光显微镜等。申请者所在单位还拥有SPF级动物房，科室建有疾病样本库，保留了大量的XX疾病相关的临床标本，包括组织蜡块、新鲜组织(液氮保存)、基因组DNA、全血和血清，可以为本试验提供标本来源。

XX医院XX科介绍，包括学科地位，科技奖项，承担课题，教授副教授数量等，表现综合实力强，科研能力和技术力量雄厚。XX医院一向重视科研工作，具有多科协作的优良传统，能够在经费、仪器、设备和人员上保障本课题的顺利完成。

申请者拥有丰富的科研经验和能力，背景良好。(介绍申请人科研背景)，所以该项目在条件上也是可行的。

4、 本项目的特色及创新之处

XXX分子是不是第一次研究，如果是则是一个创新点;

XXX分子在XX疾病中的发挥作用，之前有没有报道，如果没有也算是创新点;

XXX分子参与的XX信号通路激活是否可以解释XX疾病的发生发展过程，如果是也是一个创新点;

XXX是否可以作为药物治疗靶点，也可以作为一个创新点。

5、年度研究计划及预期研究结果

(1)年度计划

2016.01-2016.06：组织样本的收集及检测：收集XXX例组织样本，使用荧光定量PCR、Western Blot以及免疫组化等方法，检测XXX基因在正常对照以及XX疾病患者中的表达水平变化，该基因与XX疾病的临床相关性。

2016.07-2016.12：构建XX疾病动物模型，分析XX基因在不同得病程度的实验动物中的表达变化。同时使用相关药物治疗动物，并检测药物治疗后XXX基因与XX疾病的相关性。

2017.01-2017.06：分离正常动物以及得病动物的XXX组织细胞，使用病毒感染在细胞中过表达或者siRNA基因沉默XXX基因，然后检测XXX基因相关信号通路分子的表达水平变化、信号通路活化程度，以及XXX基因表达改变后对细胞增殖、分化、迁移等功能的影响。

2017.07-2017.12：进一步在细胞水平验证XXX基因调控XX疾病的分子水平作用机制。

2018.01-2018.06：诱导XX疾病动物模型，分别使用体外重组表达的XXX蛋白分子、XXX蛋白抑制剂、XXX相关信号通路抑制剂等给予动物不同剂量药物治疗，检测疾病相关指标的变化，评估XXX是否可以作为XX疾病药物治疗的作用靶点。

2018.07-2018.12：整理实验数据，撰写论文，准备结题，撰写结题报告等。

(年度计划最好和基金的年限以及研究的内容一致,不要一年一句话式)

(2)预期研究成果

1)明确XXX是否与XX疾病具有相关性;

2)明确XXX是否对XX疾病具有保护性/促进性作用;

3)明确XXX 调控XX疾病的详细分子机制;

4)进一步通过动物实验，验证XXX是否可以作为XX疾病药物治疗的靶点;

5)在专业的学术期刊上发表学术SCI论文3-4篇;

6)培养博士生1名，研究生2-3名;

7)参加国际学术会议1-2次等等

(二)工作基础与工作条件

1、工作基础

这里主要详细叙述自己的预实验情况，包括实验结果和图片

2、工作条件

实验室情况，硬件及软件等。

❆

2020国自然基金标书课题构思辅导班

（含有个性化点评辅导）

2019.7.27-28 上海中兴和泰酒店

课程背景介绍

每年几乎所有科研单位都会聘请一些专家做相关的讲座，但几乎所有讲座都时间短暂，他们只能介绍一些“大的原则”、“大的思路”。多数科研人员逐渐对这类讲座失去了兴趣，因为总是“听上去很有道理，回去之后却不知如何下手”。实操性不强是这类讲座的主要问题，医药加国自然学习班注重实操性，一对一指导，2018-2019年已经开设过八期基金班，并且受到学员们的热烈好评，两位教授的专业水平让学员们绝口称赞，在此基础上，我们决定开设2020年国自然基金班。

2020年申请新热点新趋势如何？如果您今年的申报未被批准，失败的真正原因是什么？客观原因——个人实力、研究经历不足？项目创新性不强？还是缺乏关键研究基础？主观原因——立项依据阐述不充分？有前期基础，但未能找到说服评审专家的核心“创新点”？研究方案有明显的漏洞？研究方法陈旧、落后，研究深度不够？还是标书撰写不规范，存在大量不该出现的“失误”？等等。

本学习班邀请了对各研究方向都很熟悉，评审基金标书经验极为丰富，唐教授（2017年医药加学习班金牌讲师）为大家以案例式分析方法提高标书质量。

培训目标

掌握国基金申请新动向、2020新热点和新趋势。通过本次培训班的学习，让每一位接受培训的学员都能撰写出一份既规范、也创新性突出的高质量申请书，并且可以大幅提升标书命中概率！

讲师简介

唐教授，研究员，博士生导师。先后主持973计划课题、国家自然科学基金重大研究计划课题等国家级重大项目。担任过多次基金项目的评审专家，将会以评审专家的角度来解析并回答上述的一系列问题，并且将与学员们采取现场互动的方式来授课，点评学员所写的标书存在的问题，赏析中标标书，让学员能在现场模拟撰写！自1998年来，年平均一对一辅导撰写国家自然科学基金60余份，平均中标率达85%以上。

特别擅长评审的研究方向是：肠道微生物，代谢，中医药，药理，肿瘤，非编码RNA，外泌体，表观遗传，免疫，衰老，脑神经科学等领域。

课程安排

往期学员评价

培训时间、地点

时间：2019年7月27-28日 （26号可报到）

地点：上海浦东中兴和泰酒店 浦东张江科苑路866号

培训主办方

主办方：医药加科研培训中心

承办方：上海循掘生物科技中心

住宿推荐：推荐中兴和泰酒店 经济大床房499元/间，标间578元/间。费用自理（可就近预定其他酒店）

预定电话：可自行预定，或者请在报名表中注明日期和房型要求

培训费用

3000/每位（注册费包含电子版教材、午餐，住宿费自理。）

优惠政策：

1. 提前确认报名及转账的，可以提前拿到学习材料与发票

2. 三人组团报名，每人优惠100元

3. 四人组团报名，每人优惠200元

4. 五人组团报名缴费，额外带一人免费注册！

报名咨询

扫描二维码在线登记

金老师： 王老师：

医药加精品资源推荐

利用R软件对GEO芯片进行数据处理、差异分析、热图绘制，你只需要看这些视频（免费领取）

你期待的最新2019SCI影响因子来了！（表格版方便查）

文献神器SCI-HUB限时免费

R语言实例操作高清视频，手把手教一次全学会，限时免费

用这个神器读文献，可在一天内读50篇文献【亲测好用】

做非编码RNA研究，避免走弯路，全套非编码RNA相关研究资源下载！

2019执业医师（助理）考试通关视频、秘籍、资料（共135GB）

画流程图的6款工具推荐

代谢组学培训课件及讲义在这里下载！

【标书全文鉴赏】5 份经典国自然中标标书全文，案例解读、优劣分析

咨询报名：请加学习班秘书微信yiyaojia01

6-7月份医药加课程安排